Humoral immunity is not altered in overweight pregnant Crioulo mares / Imunidade humoral não é alterada em éguas Crioulas gestantes com sobrepeso

Both pregnancy and obesity can influence significant changes in the immune system. On this basis, the present study proposes to evaluate the humoral immune response of overweight pregnant mares in response to a commercial vaccine. Thirty pregnant Crioulo mares were separated according to body condition score (BCS) into overweight (BCS≥7/9) or lean-control (BCS= 5-6/9). In each group, the animals were subdivided into vaccinated and controls. The mares were vaccinated against EHV-1 in two doses spaced 21 days apart and had their blood collected monthly, for five months, for antibody evaluation. Both vaccinated groups had an increase in specific neutralizing antibodies after the vaccine. However, after the second dose, there was no increase in antibodies in any of the groups. Vaccinated overweight and lean-control mares did not differ at any time point. Therefore, this study demonstrated that obesity does not influence the humoral immune response in pregnant Crioulo mares.(AU)

Tanto a gestação quanto a obesidade podem influenciar o desenvolvimento de alterações significativas no sistema imune, portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a resposta imune humoral de éguas gestantes com sobrepeso em resposta a uma vacina comercial. Trinta éguas Crioulas gestantes foram separadas de acordo com o escore de condição corporal (ECC) em éguas com sobrepeso (ECC≥7/9) e éguas controles (ECC=5-6/9) e, ainda, em cada grupo, os animais também foram separados em vacinados e controles. As éguas foram vacinadas contra o EHV-1 em duas doses com intervalo de 21 dias, sendo realizadas coletas de sangue mensalmente durante cinco meses para avaliação de anticorpos neutralizantes. Ambos os grupos vacinados tiveram aumento de anticorpos neutralizantes específicos após a vacina, porém, após a segunda dose, não foi observado aumento de anticorpos em nenhum dos grupos. Nenhuma diferença foi observada entre éguas vacinadas com sobrepeso e as éguas controles em nenhum momento. Assim, este estudo demonstrou que a obesidade não é um fator que influencia a resposta imune humoral de éguas Crioulas gestantes.(AU)

Alternatives for obtaining a continuous cell line from Apis mellifera / Alternativas para a obtenção de uma linhagem celular contínua de abelhas Apis mellifera

ABSTRACT: In worldwide there are reports of a significant decrease in colonies of the species Apis mellifera, caused by several factors, including viral infections. In order to study and diagnose illnesses caused by viruses, in vitro cell culture is used as a valuable tool. Yet, there are still no immortalized cell lines of honey bee Apis mellifera. Primary cell cultures are promising for this purpose and can supply the lack of continuous strains, but their establishment is difficult and laborious, which often makes them unfeasible for many research centers. Through the use of cell immortalization techniques, it is possible to develop continuous cell lines and thus benefit, in different ways, research related to different species of bees. The choice of technique is challenging, since in addition to the ability to remain viable for countless passages, cells must keep the genotype and phenotype similar or identical to the original tissue. This review intends to present methodologies that can be used to immortalize Apis mellifera cells, aiming to establish a cell line. The genotypic and phenotypic implications of each technique are evaluated, and the purpose of the cell line to be developed.

RESUMO: Ao redor do mundo há relatos da diminuição significativa de colônias da espécie Apis mellifera, causada por diversos fatores, incluindo infecções virais. Para estudo e diagnóstico de enfermidades causadas por vírus utiliza-se, como uma ferramenta valiosa, o cultivo celular in vitro. Contudo, ainda não existem linhagens celulares imortalizadas de abelhas Apis mellifera. Os cultivos celulares primários são promissores para este fim e podem suprir a falta de linhagens contínuas, porém seu estabelecimento é difícil e laborioso o que, muitas vezes, os torna inviáveis para muitos centros de pesquisa. Através do uso de técnicas de imortalização celular é possível desenvolver linhagens contínuas de células e assim beneficiar, de diversas formas, as pesquisas relacionadas às diferentes espécies de abelhas. A escolha da técnica é desafiadora, visto que, além da capacidade de permanecer viável por inúmeras passagens, as células devem manter o genótipo e fenótipo semelhante ou idêntico ao tecido original. O objetivo deste trabalho é apresentar metodologias que podem ser utilizadas para imortalização de células de Apis mellifera, visando o estabelecimento de uma linhagem celular. São avaliadas as implicações genotípicas e fenotípicas de cada técnica, e a finalidade da linhagem celular a ser desenvolvida.

Black queen cell virus and Nosema ceranae coinfection in Africanized honey bees from southern Brazil / Coinfecção por vírus da realeira negra (BQCV) e Nosema ceranae em abelhas africanizadas no sul do Brasil

Bees are fundamental in several aspects, especially in relation to plant biodiversity and pollination. Recently, immense losses are being faced in the number of Brazilian colonies, mainly in southern states of the country, which has a strong beekeeping activity. There are indications that, among the reasons for the losses, pathogens that affect the health of bees may be involved. Among them, the microsporidium Nosema and the black queen cell virus (BQCV) stand out for their prevalence. In this study, 92 colonies of 17 apiaries from southern Brazil were evaluated for infection by Nosema ceranae, Nosema apis and BQCV. Nucleic acid extractions and cDNA synthesis were performed from adult bee samples, followed by Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) and multiplex PCR. Eight BQCV positive samples were subjected to sequencing. The results showed that N. ceranae and BQCV are circulating in the Southern region of the country, which may be the reason for the loss of colonies. N. apis was not found. N. ceranae was found in 57.6% (53/92) of the colonies and BQCV in 32.6% (30/92). Co-infection was found in 25% (23/92) of the colonies studied, a factor that is suggested to be reducing the hosts' longevity due to the synergistic action of the pathogens. The samples submitted to sequencing indicated similarity of 96.8 to 100% between them, in addition to strong similarity with sequences from Asia, United States, Germany and Peru. This study reports the circulation of N. ceranae and BQCV in apiaries in southern Brazil, in addition to being the first phylogenetic analysis of the Brazilian BQCV sequence.(AU)

As abelhas mostram-se fundamentais em diversos aspectos, especialmente com relação à biodiversidade de plantas e polinização. Recentemente, estão sendo enfrentadas imensas perdas no número de colônias brasileiras, principalmente nos estados do sul do país, com forte atividade apícola. Há indicativos de que, dentre as razões para as perdas, possam estar envolvidos patógenos que afetam a saúde das abelhas. Dentre eles, o microsporídio Nosema e o vírus da realeira negra (BQCV) destacam-se pela prevalência. Neste estudo, foram avaliadas 92 colônias, de 17 apiários do sul do Brasil, a respeito da infecção por Nosema ceranae, Nosema apis e BQCV. Foram realizadas extrações de ácidos nucleicos e síntese de cDNA a partir de amostras de abelhas adultas, seguidos de Reação em Cadeia da Polimerase-Transcriptase Reversa (RT-PCR). Oito amostras positivas para BQCV foram submetidas a sequenciamento. Os resultados mostraram que N. ceranae e BQCV estão circulando na região sul do país, podendo ser a razão para as perdas de colônias. N. apis não foi encontrado. N. ceranae foi encontrado em 57.6% (53/92) das colônias e BQCV em 32.6% (30/92). Foi encontrada coinfecção por ambos em 25% (23/92) das colônias estudadas, fator que sugere a diminuição da longevidade do hospedeiro por ação sinérgica dos patógenos. As amostras submetidas ao sequenciamento indicaram similaridade de 96.8 a 100% entre elas, além de forte similaridade com sequências da Ásia, Estados Unidos, Alemanha e Peru. Este estudo relata a circulação de N. ceranae e BQCV nos apiários do sul do Brasil, além de ser a primeira análise filogenética da sequência do BQCV brasileiro.(AU)

High occurrence of felid alphaherpesvirus 1 and feline calicivirus in domestic cats from southern Brazil / Alta ocorrência de alphaherpesvirus felideo e calicivirus felino em gatos domésticos no Sul do Brasil

Felid alphaherpesvirus 1 (FeHV-1) and feline calicivirus (FCV) affect cats worldwide. The aim of this study was to evaluate the frequency of occurrence of FeHV-1 and FCV in cats with clinical signs of respiratory, oral and/or ocular disease. Samples were collected from cats cared for in veterinary ambulatory and clinics and submitted to molecular detection and viral isolation. Of the 49 cats evaluated, 45 (92%) were positive for at least one of the viruses; 82% (40/49) were positive for FeHV-1 and 41% (20/49) for FCV. Of these, 31% (15/49) were coinfection cases. For FeHV-1, 45% (18/40) of the cats tested were positive from the collection of eye swab, and the same percentage (9/20) was obtained for the FCV by the oral swab. FeHV-1 and/or FCV were isolated in 35% (17/49) of the samples. The main clinical sign observed was ocular secretion in 71% (35/49) of cats, characterized as mild serous, purulent or serosanguineous, and in some cases associated with ocular injury and marked chemosis. Our findings demonstrate the high occurrence of FeHV-1 and FCV in domestic cats in southern Brazil and indicate that measures should be implemented to improve the diagnostic, prevention and management against of these important diseases.(AU)

Alphaherpesvírus felídeo 1 (FeHV-1) e calicivírus felino (FCV) afetam gatos mundialmente. O objetivo deste estudo foi identificar a frequência de ocorrência de FeHV-1 e FCV em gatos com sinais clínicos de doença respiratória, oral e/ou ocular. Amostras foram coletadas de gatos atendidos em ambulatório e clínicas veterinárias e submetidas à detecção molecular e isolamento viral. Dos 49 gatos avaliados, 45 (92%) foram positivos para ao menos um dos vírus; 82% (40/49) foram positivos para o FeHV-1 e 41% (20/49) para o FCV. Destes, 31% (15/49) foram casos de coinfecção. Para o FeHV-1, 45% (18/40) dos gatos foram positivos na coleta do swab ocular, e o mesmo percentual (9/20) foi obtido para o FCV a partir do swab oral. FeHV-1 e/ou FCV foram isolados em 35% (17/49) das amostras. O principal sinal clínico observado foi secreção ocular em 71% (35/49) dos gatos, caracterizada como serosa, purulenta ou serossanguinolenta e, em alguns casos, associada à lesão e quemose. Nossos resultados demonstram a alta ocorrência de FeHV-1 e FCV em gatos domésticos na região Sul do Brasil e indicam que devem ser implementadas medidas para melhorar o diagnóstico, a prevenção e o manejo contra essas importantes doenças.(AU)

Actinobacillosis outbreak in cattle with clinical manifestation of hippopotamus-like face / Actinobacilose em bovinos com manifestação clínica de cara de hipopótamo

Actinobacillosis outbreak with clinical manifestation of hippopotamus-like face observed in a property located in the municipality of Capão do Leão, Southern Brazil, in September 2016, is described. The cattle herd remained for most of the year in rice stubble. When these areas were occupied with new crops, they were transferred to areas where there were small native forests. Three cattle were affected. They presented a volume increase in the nasolabial and maxillary region, and there was also regional lymph node swelling. The evolution of the disease occurred in approximately six months. In tissue fragments collected for culture, Actinobacillus lignieresii was isolated. The diagnosis was based on clinical findings, histopathological evaluation characterized by the presence of piogranulomas with Splendore Hoepli reaction in its center, bacterial isolation, and identification of A. lignieresii by polymerase chain reaction (PRC) and genetic sequencing.(AU)

Descreve-se um surto de actinobacilose com manifestação clínica de cara de hipopótamo diagnosticado em uma propriedade localizada no município do Capão do Leão, Rio Grande do Sul em setembro de 2016. Os bovinos permaneciam durante a maior parte do ano em restevas de arroz e quando as áreas eram ocupadas com novas lavouras eram transferidos para áreas onde havia pequenas matas nativas. Foram afetados três bovinos adultos que apresentavam aumento de volume na região nasolabial e maxilar e havia, também, tumefação dos linfonodos regionais. A evolução da enfermidade era de aproximadamente seis meses. Nos fragmentos coletados para cultura houve isolamento de Actinobacillus lignieresii. O diagnóstico foi baseado nos achados clínicos, na avaliação histopatológica caracterizada pela presença de piogranulomas com reação de Splendori Hoepli no centro, no isolamento bacteriano, identificação de Actinobacillus lignieresii por reação em cadeia da polimerase (PRC) e sequenciamento genético.(AU)

Viruses that affect Apis mellifera and their occurrence in Brazil / Vírus que acometem Apis mellifera e sua ocorrência no Brasil

ABSTRACT: Bees are very important insects for agriculture, fulfilling an important role in pollination and renewal of the ecosystem. However, in several countries significant losses of colonies and population decline of honeybees and native bees have been reported in recent years. Most researchers reported that premature losses are linked to several factors, including viruses that have a great impact on the colonies. This article reports the identification of new viruses, some transmission routes, the association of these parasites with the symptoms of the diseases that affect the health of honeybees, as well as viruses that have been described in Brazil.

RESUMO: As abelhas são insetos de grande importância na agricultura, cumprindo um papel muito importante na polinização e na renovação do ecossistema. No entanto, em diversos países têm sido relatadas perdas significativas de colônias e declínio da população de abelhas melíferas e nativas, nos últimos anos. Com isso, surgiram novos estudos sobre este assunto. A maioria dos pesquisadores relata que as perdas prematuras estão ligadas a diversos fatores, dentre eles os vírus, que causam grande impacto nas colônias. Este artigo visa expor as novas identificações de vírus, algumas rotas de transmissão, a associação dos mesmos a parasitas e a sintomatologia das enfermidades que afetam a saúde de abelhas melíferas, bem como os vírus que já foram descritos no Brasil.

Antigenic and immunogenic properties of the canine distemper virus nucleocapsid protein expressed in Escherichia coli employing codon optimized synthetic gene / Propriedades antigênicas e imunogênicas da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina expressa em Escherichia coli empregando gene sintético com codons otimizados

Despite common occurrence and importance of canine distemper disease the majority of tests currently available for diagnosis are hampered by either low sensitivity or specificity. In this study it was evaluated antigenic and immunogenic characteristics of a conserved region of nucleocapsid protein of canine distemper virus (rCDV NP) expressed in Escherichia coli employing a codon optimized synthetic gene. The expression of rCDVNP in Star strain (mean 300μg/mL, purified) was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis by using His-Tag monoclonal antibodies. Western blot and ELISA, employing positive and negative control dog sera, demonstrated the rCDVNP antigenicity. The rCDVNP was inoculated in hens and immunoglobulin Y (IgY) was purified from the egg yolk. The mean yield of IgY was 28.55mg/mL. IgY reacted with the recombinant protein as demonstrated by Western blot and ELISA assays. In summary, our findings demonstrated that rCDVNP is antigenic since CDV positive dog sera recognized the protein in vitro. Additionally, the rCDVNP proved to be immunogenic in hens being possible to isolate a high concentration of specific IgY antibodies from the egg yolk. Taken together, these results indicate that the rCDVNP along with the specific IgY could be useful tools for development of the canine distemper immunodiagnostic assays.(AU)

Apesar da ocorrência comum e importância da cinomose canina, a maioria dos testes atualmente disponíveis para diagnóstico são prejudicados pela baixa sensibilidade ou especificidade. Neste estudo foram avaliadas características antigênicas e imunogênicas de uma região conservada da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina (rCDV NP) expressa em Escherichia coli empregando um gene sintético e codons otimizados. A expressão na cepa Star (média de 300μg/mL, purificada) foi confirmada por SDS-PAGE e Western blot utilizando anticorpos monoclonais anti-His-Tag. A antigenicidade da rCDVNP foi demonstrada por western blot e ELISA empregando soros de cães positivos e negativos. A rCDVNP foi inoculada em galinhas e imunoglobulina Y (gY) foi obtida e purificada a partir da gema. A produção média de IgY foi 28.55mg/mL. Anticorpos IgY reagiram com a proteína recombinante, quando analisados por Western blot e ELISA. Em resumo, nossos achados demonstram que a rCDVNP produzida é antigênica, uma vez que os anticorpos de soro de cães positivos para CDV reconheceram a proteína in vitro. Além disso, a rCDVNP foi imunogênica em galinhas, sendo possível isolar anticorpos IgY específicos a partir da gema do ovo em altas concentrações. Tomados em conjunto, estes resultados indicam que a rCDVNP juntamente com a IgY específica podem ser ferramentas úteis para elaborar ensaios de imunodiagnóstico de cinomose canina.(AU)

Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina / Antiviral and virucidal potential of melittin and apamin against bovine herpesvirus type 1 and bovine viral diarrhea virus

A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.(AU)

The search for an alternative to synthetic drugs have revealed discoveries in the field of pharmacology and, according to melittin and apamin, two components of bee venom which have been described were with various pharmacological actions.This study aimed to evaluate the in vitro antiviral and virucidal capabilities of these components. Therefore, after verification of their toxic doses by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay, MDBK cells (Madin Darby Bovine Kidney) have been cultivated in microplates and treated with different concentrations of apamin, melittin and its association. This treatment occurred before and after infection with MOI (multiplicity of infection) 0.1 of cytopathogenic strains of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) strain Los Angeles and bovine viral diarrhea virus (BVDV) strain NADL. After incubation for 72 hours, 37°C, the cells were submitted to MTT assay to estimate cell viability. In parallel experiments, plates were subjected to the same procedure suffered freezing and thawing cycle the cells to rupture the same and measurement of viral titers. The virucidal assay was performed by incubating suspension of bovine herpesvirus type-1 and BVDV with apamin solutions, melittin and association for 24 hours at 37°C and 22°C. The viral titer was evaluated at 0 hours, 1, 2, 4, 8 and 24 hours of incubation. The cytotoxic concentration to 50% of the cells (CC50) of melittin was 2.32g/mL and apamin did not show toxicity at the greater concentration tested (100μg/mL). There was antiviral effect of melittin on bovine herpesvirus type-1, especially at a concentration of 2μg/mL, where was observed 85.96% cell viability when treatment was performed before the infection and 86.78% viability when the treatment was carried out after infection. There was also a 90% reduction of viral particles of bovine herpesvirus type-1. In lower concentrations (1 and 1.5μg/mL) melittin no antiviral activity because cell viability was low, showing cytopathic effect of the virus. At the association two substances there were a decrease in the title of BVDV and there was higher cell viability when compared to the isolated action of the compounds of this virus. This is confirmed in the virucidal activity, since there was a decrease of 90% of the viral particles of BVDV with the combination of the two compounds of bee venom. Acting individually, melittin showed antiviral effect and virucidal against for BoHV-1, zeroing its title in just 2 hours at 37°C. It is concluded that melittin has antiviral and virucidal action against the BoHV-1 and its association with apamin potentiate its effects against BVDV.(AU)

Atividade antiviral e virucida de extratos hidroalcoólicos de própolis marrom, verde e de abelhas Jataí (Tetragonisca angustula) frente ao herpersvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e ao vírus da diarreia viral bovina (BVDV) / Antiviral and virucidal activity of hydroalcoholic extracts of propolis brown, green and jataí bees (Tetragonisca angustula) against Bovine Herpesvirus Type-1 (BoHV-1) and Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV)

Dentre as propriedades biológicas da própolis, a atividade antimicrobiana tem merecido destacada atenção. No presente trabalho, descreve-se a ação antiviral e virucida de três extratos hidroalcoólicos de própolis (marrom, verde e de abelhas jataí (Tetragonisca angustula), frente ao Herpesvírus Bovino tipo (BoHV-1) e ao Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV). Os três extratos hidroalcoólicos foram obtidos de extração etanólica e são oriundos do sul do Brasil. A composição química dos extratos de própolis foi determinada pela cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massas (UFLC-PDA-ESI-TOF/MS) que identificou e quantificou compostos como: ácido cafeico e ácido p-cumárico, ácido clorogênico, ácido ferúlico, além de flavonoides como a rutina. A toxicidade celular bem como a atividade antiviral dos extratos de própolis em monocamadas de células MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) foi avaliada através de observação microscópica e quantificada pelo teste de MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo). O extrato de própolis de abelhas jataí demonstrou ser menos citotóxico (1,57µg/mL), quando comparado aos extratos verde (0,78µg/mL) e marrom (0,39µg/mL). Quanto a atividade antiviral, a própolis verde demostrou maior eficácia em ambos os tratamentos celulares (pós e pré-exposição) frente ao BoHV-1 em relação aos outros extratos, ou seja, houve maior viabilidade celular quando comparada aos controles de células e vírus. Já a de jataí apresentou atividade frente aos dois vírus (BoHV-1 e BVDV) no método pré-infecção, enquanto a própolis marrom demonstrou ação apenas frente ao BoHV-1 também no método pré-infecção. Para determinação da atividade virucida foram utilizadas diferentes diluições dos vírus, bem como temperaturas e tempos distintos de incubação. A própolis verde a 37°C propiciou a maior redução no título viral (4,33log) em relação a marrom (log = 3,5log) e de jataí (log = 3,24log). No entanto, frente ao BVDV a própolis jataí apresentou os melhores resultados em ambas as temperaturas (22oC e 37oC). Portanto, os extratos avaliados apresentaram atividade antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e BVDV, o que os torna alvo para o desenvolvimento de novos biofármacos como alternativa ao uso de antivirais comerciais em Medicina Veterinária.(AU)

Among the biological properties of propolis, the antimicrobial activity has received prominent attention. In this paper, we describe the antiviral and virucidal effect of three hydroalcoholic extracts of propolis (brown, green and jataí bees (Tetragonisca angustula), against bovine herpesvirus type-1 (BoHV-1) and bovine viral diarrhea Virus (BVDV). All hydroalcoholic extracts were obtained from ethanol extraction. The chemical composition of propolis extracts was determined by high-performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer (UFLC-PDA-ESI-TOF/MS) to identify and quantify compounds such as caffeic acid and p-coumaric acid, chlorogenic acid, ferulic, and flavonoids such as rutin. Cell toxicity and antiviral activity of propolis extracts in monolayers of MDBK cells (Madin-Darby Bovine Kidney) were assessed by microscopic observation and quantified by the MTT assay (3- (4.5 dimethylthiazol-2yl) -2- 5-diphenyl-2H-tetrazolato bromine). Propolis extract from Jataí bees proved to be less cytotoxic (1.57mg / ml) when compared to green extracts (0.78mg / ml) and brown (0.39mg/mL). Regarding antiviral activity, propolis has shown greater efficacy in both cellular treatments (post and pre-exposure) against BoHV-1 when compared to other extracts, ie, there was increased cell viability compared to cell and virus controls. Extracts from Jataí showed activity against both viruses (BoHV-1 and BVDV) infection in the pre-test, whereas brown propolis demonstrated action only against the BoHV-1 in the pre-infection method. To determine the virucidal activity, it were used different dilutions of virus, as well as different temperatures and incubation times. The green propolis at 37°C led to a greater reduction in viral titer (4.33log) compared to brown (3.5log) and jataí (3.24log). Jataí propolis showed the best results in both temperatures (22oC and 37oC) when tested against BVDV. In summary, the evaluated extracts showed antiviral and virucidal activity against BoHV-1 and BVDV, and may be important targets for the development of new compounds as an alternative to commercial antivirals.(AU)

Activity of the antimicrobial peptide P34 against bovine alphaherpesvirus type 1 / Atividade do peptídeo antimicrobiano P34 contra o alfaherpesvírus bovino tipo 1

ABSTRACT: Previous studies have demonstrated the antimicrobial activity of the peptide P34. In this study, the antiviral potential of P34 and the in vitro mechanism of action were investigated against bovine alphaherpesvirus type 1 (BoHV1). P34 exhibited low toxicity, a high selectivity index (22.9) and a percentage of inhibition of up to 100% in MDBK cells. Results from antiviral assays indicated that P34 did not interact with cell receptors, but it was able to inhibit the viral penetration immediately after pre-adsorption. In addition, BoHV1 growth curve in MDBK cells in the presence of P34 revealed a significant reduction in virus titer only 8h post-infection, also suggesting an important role at late stages of the replicative cycle. Virucidal effect was observed only in cytotoxic concentrations of the peptide. These findings showed that the antimicrobial peptide P34 may be considered as a potential novel inhibitor of in vitro herpesviruses and must encourage further investigation of its antiherpetic activity in animal models as well as against a wide spectrum of viruses.

RESUMO: A atividade antimicrobiana do peptídeo P34 já foi previamente demonstrada. Neste estudo, o potencial antiviral do P34 e o mecanismo de ação in vitro contra o alfaherpesvírus bovino tipo 1 (BoHV1) foram investigados. O P34 exibiu baixa toxicidade, alto índice de seletividade (22.9) e percentagem de inibição viral de até 100% em células MDBK. Os resultados dos ensaios antivirais indicaram que não interage com receptores celulares, mas é capaz de inibir a penetração viral, imediatamente após a pré-adsorção. Além disso, a curva de crescimento do BoHV1 em células MDBK na presença do P34 revelou uma significativa redução no título somente após 8h de infecção, sugerindo também uma importante atividade do peptídeo nas fases finais do ciclo replicativo. Efeito virucida frente / BoHV1 foi observado apenas em concentrações citotóxicas do peptídeo. Os dados obtidos indicam que o peptídeo antimicrobiano P34 pode ser considerado um potencial composto inibidor de herpesvírus, in vitro, e estimulam posteriores investigações sobre sua atividade anti-herpética em modelos animais, bem como contra outros vírus.

Doenças infecciosas e parasitárias por veiculação hídrica e doenças respiratórias em área industrial, Norte do Brasil / Waterborne infectious and parasitic diseases and respiratory diseases in an industrial area, Northern Brazil

Resumo A cidade de Barcarena, no Estado do Pará, é um importante polo industrial que, nos últimos anos, esteve sujeita a registros de incidentes ambientais. Neste estudo, foi apresentado o perfil de morbidade por doenças infecciosas e parasitárias (DIP) de veiculação hídrica e por doenças respiratórias (DR) em indivíduos residentes do município de Barcarena, no período de 2008 a 2012. A pesquisa foi realizada com dados secundários sobre mortalidade e internações, obtidos a partir do Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS). O coeficiente médio de mortalidade para as DIP apresentou 0,37 óbito por 1.000 habitantes. A faixa etária mais afetada pelos casos de internações por DIP foi a de 0 a 5 anos, com coeficiente médio de incidência na ordem de 31,8 por 100 mil habitantes. Para as DR, as crianças com faixa etária de 0 a 14 anos foram, aparentemente, as mais expostas, com 62,85%, e os idosos acima de 60 anos, com 15,16% dos casos. As taxas de incidência e de mortalidade por DR ficaram na ordem de 39 por 100 mil habitantes. Os indicadores de saúde estudados nos alertam um risco para à saúde de populações em Barcarena e sugerem estudos quantitativos e qualitativos mais específicos de possíveis contaminações ambientais na região.

Abstract Barcarena city is an important industrial hub that has been subjected to environmental incidents in recent years. The present study reports the morbidity profile of waterborne infectious and parasitic diseases (IPD) and respiratory diseases (RD) among individuals living in Barcarena city is from 2008 to 2012. The survey was conducted with secondary data on mortality and hospital admission rates obtained from the Computer Department of the Ministry of Health - DATASUS. The average mortality rate (AM) to IPD indicated 0.37 deaths per 1000 inhabitants. The age group mostly represented in cases of hospitalizations caused by IPD was 0-5 years. The average coefficient of incidence due to this cause in the case of age group below five years of age was around 31.8/100,000 inhabitants. Regarding DR, children aged between 0 and 14 years are apparently the most exposed ones, corresponding to 62.85% of the cases, and the elderly over 60 years of age are the most exposed, with 15.16% of the cases. Incidence and mortality rates due to DR were in the order of 39/100,000 inhabitants. The health indicators studied warn that populations in Barcarena are under possible risks to health and suggest that more specific studies on quantitative and qualitative possible environmental contamination in the region are still needed.

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

Mercury in fish and sediment of Purus River, Acre State, Amazon / Mercúrio em peixe e em sedimento do Rio Purus, Estado do Acre, Amazônia

Abstract Core subject To quantify the Hg content of sediment and fish collected along the Purus River (Acre State, Amazon) in order to identify if those samples could be a potential route of Hg exposure to the population of Manoel Urbano (a riverside community). Methods The total mercury (THg) was quantified using the Cold Vapor Atomic Absorption technique. Results We collected 06 samples of sediment and 264 samples of fish. The Hg in sediments ranged between 0.038 and 0.065 µg.g–1.The results indicate that sediment is in agreement with “uncontaminated” Amazonian rivers. The carnivorous species presented the highest level of Hg on muscle (mean 0.927 μg/g–1), followed by piscivorous (mean 0.873 μg.g–1), planktophagus (mean 0.566 μg.g–1), omnivorous (mean 0.533 μg.g–1) and detritivorous (mean 0.176 μg/g–1). Fourty four percent (44%) of the total species collected presented mean levels of THg on muscle, a percentage greater than the threshold recommended by WHO. Conclusion Some species may be a route for Hg exposure. The sediment is within the normality. The authors suggest that other factors, such as culture and society, should be considered for future researches in order to promote the population healths.

Resumo Tema central Quantificar o teor de mercúrio (Hg) em sedimentos e em peixes coletados ao longo do rio Purus, no Estado do Acre, Região Amazônica, a fim de identificar se essas amostras conferem uma via potencial de exposição do Hg para a população de Manoel Urbano (uma comunidade ribeirinha). Métodos O mercúrio total (HgT) foi quantificado utilizando a técnica de absorção atômica por vapor frio. Resultados Seis amostras de sedimentos e 264 amostras de peixes foram coletadas. O Hg em sedimentos de fundo variou entre 0,038 e 0,065 μg.g–1 (média de 0,050 μg.g–1). Os resultados indicam que os sedimentos estão de acordo com rios amazônicos “não contaminados”. As espécies carnívoras apresentaram o mais alto nível de Hg no músculo (média de 0,927 μg/g–1), seguido por piscívoros (média de 0,873 μg/g–1), planctófagos (média de 0,566 μg/g–1), onívoros (média de 0,533 μg/g–1) e detritívoros (média de 0,176 μg/g–1). Além disso, 44% do total de espécies coletadas apresentaram níveis médios de HgT no músculo superior ao limite recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS). Conclusão Algumas espécies podem ser uma via para a exposição ao Hg. O sedimento encontra-se dentro na normalidade. Os autores consideram que outros fatores, como a cultura e a sociedade, devem ser considerados para pesquisas futuras a fim de promover a saúde dessa população.

Epidemiology of spine fractures in motorcycle accident victims / Epidemiologia das fraturas da coluna vertebral em vítimas de acidente motociclístico / Epidemiología de las fracturas vertebrales en las víctimas de accidentes de motocicletas

ABSTRACT. Objective: To analyze the incidence of spinal injuries between 2000-2010 due to motorcycle accidents and the relation to the increase in motorcycle sales in the same period, as well as the anatomical distribution of these spinal injuries. Methods: Data were collected from 1,295 records of patients who have suffered spinal injury resulting from motorcycle accidents admitted to the ward TRM (Spinal Cord Trauma) of the Hospital Geral do Estado da Bahia from 2000 to 2010 in this retrospective study. We selected 110 medical records and collected information on sex, age, neurological deficit on admission (according to Frankel scale), diagnosis, and level of injury. Results: Between 2000 and 2010 there was an increase of almost five times in the incidence of patients who have suffered spinal injury due to motorcycle accidents. More than half (51.4%) had cervical spine injury, 37.2% thoracic spine injury and 11.34% had lumbar spine injury. Only 34.3% of patients had no neurological deficit on admission and patients with thoracic spine fracture had a higher incidence and severity of lesion. The average age of patients was 30 years. Conclusions: The increased incidence of spinal injuries due motorcycle accidents occurred in the same period in which there was an increase in motorcycle sales in the country. Patients who have suffered those injuries were young, with higher incidence in the cervical and thoracic spinal levels and high rates of neurological deficit.

RESUMO. Objetivo: Analisar a incidência de lesões na coluna vertebral entre 2000 e 2010 devido a acidente motociclístico e sua relação com o aumento da venda de motos nesse período, assim como a distribuição anatômica dessas lesões na coluna. Métodos: Trata-se de estudo retrospectivo, no qual foram coletados dados de 1.295 prontuários de pacientes que sofreram lesão da coluna decorrente de acidente motociclístico internados na enfermaria de TRM (Trauma Raquimedular) do Hospital Geral do Estado da Bahia no período de 2000 a 2010. Foram selecionados 110 prontuários e catalogadas as informações com relação ao sexo, idade, déficit neurológico na apresentação (de acordo com a escala de Frankel), diagnóstico e nível da lesão. Resultados: Entre os anos de 2000 e 2010 houve um aumento de quase cinco vezes na incidência de pacientes que sofreram lesão da coluna devido a acidente motociclístico. Mais da metade (51,4%) apresentou lesão na coluna cervical, 37,2% na torácica e 11,4% na lombar. Somente 34,3% dos pacientes não tinham déficit neurológico na admissão e pacientes com fratura da coluna torácica tiveram maior incidência e gravidade de lesão medular. A média de idade dos pacientes foi de 30 anos. Conclusões: O aumento da incidência de lesões na coluna devido acidente motociclístico ocorreu no mesmo período em que houve aumento das vendas de motos no país. Os pacientes que sofreram essas lesões eram jovens, com incidência maior nos níveis cervical e torácico e altos índices de déficit neurológico.

RESUMEN. Objetivo: Analizar la incidencia de lesiones de la columna entre 2000-2010 debido a los accidentes de motocicleta y su relación con el aumento de las ventas de motocicletas en ese período, y la distribución anatómica de las lesiones de la columna vertebral. Métodos: Estudio retrospectivo en el que se recogieron datos de 1.295 registros de pacientes que han sufrido lesiones de la columna resultantes de accidentes de motocicleta ingresados en la sala de hospital TRM (Trauma de la Médula Espinal) del Hospital Geral do Estado da Bahia entre 2000 y 2010.Se seleccionaron 110 historiales médicos y se recogió información sobre el sexo, edad, déficit neurológico al ingreso (según la escala de Frankel), el diagnóstico y el nivel de la lesión. Resultados: Entre 2000 y 2010 hubo un aumento de casi cinco veces en la incidencia de pacientes que han sufrido lesiones de la columna debido a los accidentes de motocicleta. Más de la mitad (51,4%) tuvo lesiones de la columna cervical, el 37,2% tenían lesión en la columna torácica y el 11,4%, en la lumbar. Sólo el 34,3% de los pacientes no tuvieron déficit neurológico al ingreso y los pacientes con fractura de la columna torácica tuvieron una mayor incidencia y severidad de la lesión de la médula espinal. La edad promedio de los pacientes fue 30 años. Conclusiones: El aumento de la incidencia de lesiones en la columna debido a los accidentes de motocicleta se produjo en el mismo período en que hubo un aumento en las ventas de motocicletas en el país. Los pacientes que han sufrido esas lesiones eran jóvenes, con mayor incidencia en los niveles cervicales y torácicos y altas tasas de déficit neurológico.

Avaliação da qualidade da água de consumo por comunidades ribeirinhas em áreas de exposição a poluentes urbanos e industriais nos municípios de Abaetetuba e Barcarena no estado do Pará, Brasil / Assessment of the quality of water for consumption by river-bank communities in areas exposed to urban and industrial pollutants in the municipalities of Abaetetuba and Barcarena in the state of Pará, Brazil

Resumo Apesar dos grandes avanços tecnológicos introduzidos nos processos de tratamento das águas de consumo humano, as utilizadas para abastecimento tornaram-se um grande problema de saúde pública. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade das águas consumidas em duas comunidades ribeirinhas no Estado do Pará expostas a poluentes domésticos e industriais. Foram realizadas quatro campanhas de amostragem nas duas comunidades e as variáveis utilizadas para o cálculo do Índice de Qualidade da Água (IQA) foram pH, Sólidos Totais, Cloreto, Fluoreto, Dureza e N-Nitrato. As águas utilizadas para consumo humano na Comunidade Maranhão, onde não há contaminação por poluentes industriais, apresentaram amostras adequadas, com melhora no período seco; já as águas de Vila do Conde, local próximo à atividade industrial, estiveram em ambos os períodos sazonais com qualidade inaceitável para consumo humano. Os principais parâmetros afetados foram o pH e o N-Nitrato, com valores até 25 vezes a referência da legislação brasileira para água de consumo humano. Esses resultados indicaram maior interferência antrópica no entorno da Vila do Conde em Barcarena, necessitando-se de avaliações clínicas por profissionais especializados sobre o estado de saúde desta população.

Abstract In spite of the great technological advances in processes for treatment of water for human consumption, water actually used for supply has become a major public health challenge. This study assesses the quality of the water consumed in two riverside communities in the Brazilian state of Pará, in an area exposed to domestic and industrial pollutants. Four campaigns of sampling were carried out in the two communities. The variables used for the calculation of the water quality index – Índice de Qualidade da Água, or IQA – were: pH, total solids, chloride, fluoride, hardness and N-Nitrate. The waters used for human consumption in the Maranhão Community, where there is no contamination by industrial pollutants, presented adequate samples, with improvement in the dry season; on the other hand the waters of the Vila do Conde, a location close to the industrial activity, had quality that was unacceptable for human consumption in both the seasonal periods. The principal parameters affected were pH and N-Nitrate, with values up to 25 times the reference level of the Brazilian legislation for water for human consumption. These results indicated greater anthropic interference in the vicinity of Vila do Conde, in Barcarena. It is concluded that this population is in need of clinical assessments by specialized professionals on the state of its health.

Antiviral activity of a Bacillus sp: P34 peptide against pathogenic viruses of domestic animals

P34 is an antimicrobial peptide produced by a Bacillus sp. strain isolated from the intestinal contents of a fish in the Brazilian Amazon basin with reported antibacterial activity. The aim of this work was to evaluate the peptide P34 for its in vitro antiviral properties against canine adenovirus type 2 (CAV-2), canine coronavirus (CCoV), canine distemper virus (CDV), canine parvovirus type 2 (CPV-2), equine arteritis virus (EAV), equine influenza virus (EIV), feline calicivirus (FCV) and feline herpesvirus type 1 (FHV-1). The results showed that the peptide P34 exhibited antiviral activity against EAV and FHV-1. The peptide P34 inhibited the replication of EAV by 99.9% and FHV-1 by 94.4%. Virucidal activity was detected only against EAV. When P34 and EAV were incubated for 6 h at 37 °C the viral titer reduced from 10(4.5) TCID50 to 10(2.75) TCID50, showing a percent of inhibition of 98.6%. In conclusion, our results demonstrated that P34 inhibited EAV and FHV-1 replication in infected cell cultures and it showed virucidal activity against EAV. Since there is documented resistance to the current drugs used against herpesviruses and there is no treatment for equine viral arteritis, it is advisable to search for new antiviral compounds to overcome these infections.

Avian IgY antibodies: characteristics and applications in immunodiagnostic / Anticorpos IgY aviário: características e aplicações em imunodiagnóstico

Immunoglobulin Y (IgY) is the major antibody isotype in birds, reptiles, amphibia, and lungfish, playing a similar biological role as mammal IgG. Due to its phylogenetic distance, immune diversification and presence in the egg yolk, IgY provide a number of advantages in immunodiagnostic compared to IgG from mammals. Moreover, IgY production is in agreement with international efforts to reduce, refine and if possible, to replace animals in experimentation, contributing substantially in favor of animal welfare. This article presents an overview about structural and functional features, production and applications of IgY in immunodiagnostic, as well as the advantages of chicken antibodies use.

A imunoglobulina Y (IgY) é a classe de anticorpos de maior importância em aves, répteis, anfíbios e peixes pulmonados, desempenhando um papel semelhante a IgG de mamíferos. Devido a sua distância filogenética, mecanismos de diversificação imune e presença na gema do ovo, IgY proporciona uma série de vantagens em imunodiagnóstico, quando comparada a IgG de mamíferos. Além disso, esse método alternativo de produção de anticorpo está de acordo com os esforços internacionais para reduzir, refinar e, se possível, substituir animais em experimentação, contribuindo substancialmente a favor do bem-estar animal. Este artigo apresenta uma revisão sobre as características estruturais e funcionais da IgY, bem como os métodos de produção, vantagens e aplicações em imunodiagnóstico, além das vantagens da sua utilização.

Longitudinal assessment of mercury exposure in schoolchildren in an urban area of the Brazilian Amazon / Avaliação longitudinal da exposição ao mercúrio em crianças de uma área urbana na Amazônia brasileira

This study was a longitudinal assessment of mercury exposure in schoolchildren in an urban area of the Brazilian Amazon. The study population consisted of 90 children whose exposure levels were assessed by testing mercury levels in the umbilical cord blood and mothers' blood samples in 2000-2001, and in the children's hair and blood samples. The study also used a questionnaire on demographic and socioeconomic data, fish consumption, and self-reported disease history. Mean mercury level in hair in 2010 was approximately 1µg/g, ranging up to 8.22µg/g, similar to 2004 and 2006. These figures can be explained by low fish consumption. Mean blood mercury levels at birth exceeded 10µg/L, ranging up to nearly 60µg/L, which indicates mercury transfer across the placenta. There was a significant increase in blood mercury from 2004 to 2006 (p < 0.001), suggesting exposure through air pollution. The main exposure to mercury was during pregnancy.

O objetivo deste estudo foi realizar avaliação longitudinal da exposição de crianças de uma área urbana da Amazônia brasileira ao mercúrio (Hg). A população foi composta por 90 crianças, cuja exposição foi avaliada desde o nascimento por meio das análises dos teores de Hg no sangue do cordão umbilical e no sangue das mães em 2000/2001, e em amostras de cabelo e sangue das crianças. Os procedimentos incluíram também um questionário com informações demográficas, socioeconômicas, sobre consumo de peixes e morbidade referida. A média dos teores de Hg no cabelo em 2010 foi próxima a 1µg/g e sua amplitude 8,22µg/g, semelhantes aos anos 2004 e 2006, podendo ser explicada pela baixa ingestão de peixes. A média dos teores de Hg no sangue das crianças ao nascer ultrapassou 10µg/L e sua amplitude atingiu quase 60µg/L, indicando transferência do Hg através da barreira placentária. Ocorreu aumento significativo dos teores de Hg no sangue entre 2004 e 2006 (p < 0,001), sugerindo a possibilidade de exposição atmosférica ao Hg. O principal período de exposição ao Hg ocorreu durante a gestação.

Hemorróidas / Hemorrhoids

Este artigo tem o objetivo de abordar o tema doença hemorroidária em um aspecto geral e principalmente apresentar as diversas formas de tratamento realizadas atualmente, tanto conservados quanto cirúrgico, e suas indicações.